ارتباط با Schizophyllum Commune: ایجاد فرهنگ نابارور از قارچ های یافت شده: 3 مرحله (همراه با تصاویر)

2024 نویسنده: John Day | [email protected]. آخرین اصلاح شده: 2024-01-30 08:57

این دستورالعمل بر توضیح نحوه ایجاد فرهنگ نابارور از قارچ Schizophyllum Communa (نام مشترک قارچ Split Gill) بر روی یک ظرف پتری با استفاده از قارچ های یافت شده متمرکز شده است. کمون اسکیزوفیلوم دارای بیش از 28000 جنس است ، در همه قاره ها به جز قطب جنوب یافت می شود و این توانایی را دارد (مانند دیگر قارچ های پوسیدگی سفید و قهوه ای) آلودگی های مختل کننده غدد درون ریز را کاهش دهد (پلاستیک ها ، هورمون های شبیه ساز پتروشیمی های صنعتی مانند کود Atrazine ، نرم کننده Bisphenol-A یا هورمون مصنوعی Diethylstilbestrol).

من به تکنیک های شناسایی قارچ وحشی ، نحوه تهیه یک ظرف پتری آگار مغذی و نحوه استفاده از قارچ های پیدا شده برای رشد یک فرهنگ جدا شده عقیم در پتری دیش خود می پردازم. سایر دستورالعمل های این مجموعه به تکنیک هایی مانند شناسایی ژنتیکی قارچ ها ، سنجش آنزیمی ساده برای آزمایش توانایی قارچ در تجزیه پلاستیک ها و آلودگی شبیه ساز هورمون ها و نحوه تهیه پنیر با S. Commune می پردازد.

این پروژه از کار مشترک مری ماژیک ، پائولا پین و من در حین اقامت در HANGAR در بارسلونا اسپانیا در سپتامبر 2018 بیرون آمد. برای اطلاعات بیشتر در مورد پروژه در read بخوانید یا از بلا بلا استفاده کنید و مستقیماً به مرحله بروید 1 برای آموزش:)

تصاویر از Schizophyllum Commune Fanzine هستند ~ فایلها را می توانید به صورت رایگان در اینجا بارگیری کنید

در طول اقامت سه هدف اصلی ما این بود:

1 ، تحقیق و هضم ادبیات علمی کمون اسکیزوفیلوم و تعاملات مختلف آن با هورمون ها و آلاینده های پتروشیمی مختل کننده غدد درون ریز. S. Commune یکی از بسیاری از قارچ های "پوسیدگی سفید و قهوه ای" است که توانایی تجزیه آلودگی های هورمونی و غدد درون ریز را دارد. این قارچ ها با دفع آنزیم های "لیگنوسلولوزیک" از بدن شبکه ای خود یا "میسلیوم" از درختان تغذیه می کنند و آنزیم ها قادر به تجزیه سلولز و لیگنین موجود در درختان هستند. به دلیل شباهت های ساختاری بین سلولز ، لیگنین و EDS ' / هورمون هایی مانند آترازین ، BPA ، استرادیول ، دی اتیل استیلبسترول و نونیل فنول ، آنزیم های "لیگنوسلولوزیک" ترشح شده توسط قارچ ها نیز می توانند طیف وسیعی از سموم را تجزیه کنند. علاوه بر این ، S. Commune پلی ساکاریدهای تحریک کننده ایمنی تولید می کند که به عنوان پیشگیری کننده و درمان کننده سرطان مفید هستند (در ژاپن برای درمان سرطان های دهانه رحم تأیید شده است) ، می تواند خواص فیتواستروژنیک گیاهان خاصی را از طریق تخمیر افزایش دهد ، می تواند به جای پنیر و لاکتوباسیلیوس در فرآیندهای تولید پنیر و تولید آنزیمهای حل کننده لخته ترومبین (در درمان ترومبوز مفید است). به طرز عجیبی ، همین "بتا-گلوکان" که می توان با آب جوش به عنوان درمان سرطان و محرک های ایمنی استخراج کرد ، همچنین توسط صنعت نفت برای افزایش عملکرد روغن استفاده می شود و S. Commune را در یک حلقه بازخورد دو طرفه به تولید اختلال غدد درون ریز پیوند می دهد. پتروشیمی قادر به تخریب و اصلاح است.

2 ، پروتکل های DIY و DIWO (با دیگران انجام دهید) ایجاد کنید که این کارها را برای کار با EDC و قارچ ها برای ترجمه دانش علمی مدون به زبانی که در دسترس تر است ، ساده کند. از این مطالب برای آموزش ، پرسش ، مقاومت در برابر استعمارهای مولکولی و ایجاد روایت های جدید در مورد چند گونه ها و جهش زایی جمعی ما استفاده کنید.

3 ، گفتمان غیردسترس زا و عجیب و غریب را در اطراف مواد شیمیایی مختل کننده غدد درون ریز (EDC) به چالش بکشید. به نقل از بورسیه تحصیلی مالین آه کینگ و ایوا هیوارد در مورد این مسائل ، "بسیاری از روزنامه ها این حدیث های ترسناک غدد درون ریز را از حیاط خانه ما گزارش می دهند. در تلاش برای پیش بینی این موضوعات-همانطور که در رسانه های بعدی توضیح خواهیم داد" یک دگردیسی فرانکنشتاین را روشن کرده است. جنسیت و جنسیت را تهدید می کند. به جای پرداختن به بسیاری از خطرات دیگر سلامتی مرتبط با قرار گرفتن در معرض سموم ، مهمترین و بحث انگیزترین موضوعات بحث برانگیز و واکنش انتقادی است. این س questionsالات را مطرح می کند: چرا رابطه جنسی از سرطان ، بیماریهای خود ایمنی ، مرکزی تر است ، و حتی مرگ؟ چه اعصاب فرهنگی (که بسیاری از آنها جهانی شده است) برانگیخته می شود؟ و ، برای ما که نگرانی های فمینیستی داریم ، چگونه می توان بحث را به دور از ذات گرایی ، تبعیض جنسیتی و هترونورماتیسم تغییر جهت داد؟ " (جنسیت های سمی).

Schizophyllum Commune یک "قارچ پوسیدگی سفید" منحصر به فرد است ، زیرا بیش از 28000 جنس ژنتیکی دارد. بسیاری معتقدند این سازگاری تنوع ژنتیکی باورنکردنی این گونه را که در همه قاره های جهان به جز قطب جنوب وجود دارد ، فعال کرده است. ما می خواستیم تعدد جنسی زیبا این ارگانیسم را به عنوان یکی از نمونه های عجیب زیست شناسی جشن بگیریم. گفتمان غالب پیرامون EDC در رسانه ها و حتی فعالان محیط زیست به شدت بر روایات غیرعلمی متمرکز است که این مولکول ها باعث ایجاد جنسیت ها یا جنسیت های خاصی می شوند که جامعه ما آنها را آسیب شناسی می کند ، برچسب هایی غیر هنجاری زده و اغلب به دنبال حذف یا اجتناب از آنها است. نه تنها هراس جنسی ، ترسناک دلهره آور و اعتراض عمومی در مورد EDC از نظر علمی غیر واقعی است (هورمون ها و اختلالات غدد درون ریز افراد را دچار دلهره یا ترنس نمی کند) بلکه از تمام آثار مخرب واقعی که ما می توانیم با EDC مرتبط کنیم ، چشم پوشی می کنیم: اختلالات تیروئید ، برخی سرطان ها ، در میان سایر خطرات سلامتی.

مرحله 1: کمون Schizophyllum Living را در جامعه خود بیابید

فرهنگ های استریل درجه یک آزمایشگاه Schizophyllum Commune را می توان با حدود 350 دلار از یک بانک فرهنگ میکروبیولوژیکی مانند ATCC خریداری کرد … به همین دلیل ما کشت قارچ های وحشی را به صورت رایگان ترجیح دادیم:)

به خاطر اینکه در مورد کمون اسکیزوفیلوم مطالعه می کردم ، خیلی راحت کار کردم و روزی متوجه شدم که روی درختی جلوی آپارتمان من رشد می کند. اگر خوش شانس نیستید که به طور تصادفی با S. Commune در همسایگی خود برخورد کنید ، باید به منطقه ای جنگلی بروید تا قارچ های "براکت" را که روی درختان سخت چوبی رشد می کنند جستجو کنید (درختانی که به نظر می رسد این کار را نمی کنند) خیلی خوب) یا درختان افتاده S. Commune یکی از رایج ترین قارچ های موجود در سراسر جهان است و اساساً در هر جایی که چوب سختی برای رشد وجود داشته باشد ، یافت می شود.

Mushroomobserver.org توضیحات مفصلی در مورد اینکه کجا و چه زمانی به احتمال زیاد S. Commune را پیدا می کنید ، و همچنین نحوه شناسایی آن و نحوه جلوگیری از "شبیه به هم" که ممکن است منجر به شناسایی اشتباه شود ، ارائه می دهد:

"شناسایی: اسکیزوفیلوم کمون به راحتی با آبشش های شکافته ، موهای متراکم و کلاه به شکل فن تشخیص داده می شود. عرض کلاه 1-4.5 سانتی متر است و معمولاً به شکل پوسته یا فن با سطح خاکستری تا سفید است. بازیدوسپورها 2 × 5-7.5 هستند. -3 میکرومتر. قارچ مشابهی که با نام "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa شناخته می شود به طور گسترده ای توزیع نشده است.

HABITAT: Schizophyllum commune روی چوب سخت با استفاده از آنزیم هایی برای تجزیه لیگنین رشد می کند و باعث "پوسیدگی سفید" می شود. بنابراین در بیشتر مناطق چوبی یافت می شود. این گیاه را می توان در طول سال به دلیل خشک شدن ، آب رسانی مجدد در شرایط بهتر و سپس اسپور شدن یافت.

این قارچ می تواند در درختان با قطر کوچک که تحت فشار عوامل دیگر مانند خشکسالی قرار دارند ، انگلی باشد.

شبیه به هم باشید: Plicaturopsis crispa یا "Cillped Gill" شبیه به Spill Gill است. همچنین دارای بدنه بارده پوسته/فن است. با این حال ، کلاه قهوه ای مایل به قرمز یا قهوه ای زرد است و قسمت زیرین آن بسیار متمایز است. دارای رگ های منقبض مانند آبشش هایی است که بسیار متفاوت از آبشش های شکافته Schizophyllum commune هستند. آبشش تنگ کمتر رایج است اما وقتی پیدا می شود متمایز است."

مرحله 2: برای رشد S. Commune صفحات آگار مغذی تهیه کنید

برای جداسازی فرهنگ S. Commune ، به برخی از ظروف پتری پر از غذا برای قارچ نیاز دارید. عصاره مالت آگار یک غذای ساده برای S. Commune یا "مواد مغذی" است که می تواند با مواد قابل دسترسی تهیه شود. همچنین منبع خوبی برای استفاده در هنگام آزمایش سنجش آنزیمی با S. Commune و سایر قارچ های پوسیدگی سفید یا قهوه ای است - این فرآیند در دستورالعمل دیگری پوشش داده خواهد شد.

نکته: اگر در یافتن S. Commune مشکل داشتید ، بسیاری از قارچ های دیگر در یک خانواده وجود دارند که می توانند با استفاده از فرایندهای مشابه کشت داده شوند و اگر در تخریب آلاینده های مختل کننده غدد درون ریز بهتر نباشند ، به همان اندازه خوب هستند. دم بوقلمون (Trametes Versicolor) در بسیاری از مطالعات یافت شده است که بر روی صدها قارچ پوسیدگی سفید و قهوه ای به عنوان بزرگترین تولید کننده آنزیم های "لیگنوسلولوزیک" که آلودگی پتروشیمی را تخریب می کنند ، بررسی شده است. قارچ صدفی نیز در این مورد بسیار خوب است.

من کار میکروبیولوژیکی خود را در آزمایشگاه زیست شناسی جامعه به نام BUGSS انجام می دهم (فضای علمی زیرزمینی بالتیمور) که در آن به ظروف شیشه ای ، ترازوهای دیجیتال ، استوانه های درجه بندی شده ، اتوکلاو (برای عقیم سازی حرارت و فشار رسانه ها) و غیره دسترسی دارم. در دهه گذشته در سراسر جهان ظاهر شد ، بنابراین ممکن است بخواهید این لیست را بررسی کنید تا ببینید آیا در نزدیکی شما وجود دارد یا خیر. اگر آزمایشگاه اجتماعی بزرگی مانند این در منطقه خود ندارید ، باید در تجهیزات اولیه این فرآیند سرمایه گذاری کنید ، مانند:

1 ، مقیاس دیجیتال برای اندازه گیری دقیق مواد تشکیل دهنده شما

2 ، یک زودپز برای ضدعفونی کردن رسانه شما با حرارت و بخار

3 ، ظروف پتری را می توان بسیار ارزان از طریق اینترنت خریداری کرد ، شیشه های قابل استفاده مجدد یا پلاستیک یکبار مصرف کار می کند اما قابل استفاده مجدد همیشه بهتر است:)

4 ، مقداری ظروف شیشه ای برای مخلوط کردن مواد ، استریل کردن و ذخیره سازی.

اگر نمی خواهید روی آن تجهیزات سرمایه گذاری کنید ، می توانید صفحات آگار عصاره مالت از پیش ریخته شده را برای خرید در وب سایت هایی مانند آمازون پیدا کنید.

در حال حاضر راهنماهای عالی و فیلم های یوتیوب در مورد چگونگی تهیه غذاهای پتری از مواد مغذی خود در خانه وجود دارد. بنابراین بجای وارد شدن به جزئیات زیاد در این مورد ، من فقط به یک زن و شوهر پیوند می دهم - و دستور تهیه 2٪ عصاره مالت آگار ، که مواد مغذی مورد استفاده شما است را ارائه می دهم.

Freshcap Musrooms: راهنمای نحوه تهیه بشقاب آگار برای پرورش قارچ در خانه

Mykoweb: شروع کار با پرورش قارچ

برگه اطلاعات فنی عصاره مالت آگار

2٪ عصاره مالت آگار (MEA) ci دستور تهیه 1 لیتر:

عصاره مالت 20 گرم (تهیه رایج آبجو ، می توان به صورت آنلاین خریداری کرد)

15 گرم آگار (ماده جامد کننده - برای پخت و پز اغلب استفاده می شود بنابراین می توان آن را به صورت آنلاین یا در برخی از خواربارفروشی ها خریداری کرد)

1 لیتر H20 (من معمولاً از آب اسمز معکوس استفاده می کنم که می توان آن را در اکثر فروشگاه های مواد غذایی در کوزه های گالن خریداری کرد)

اگر می خواهید مقدار کمتری تهیه کنید ، این دستور غذا به راحتی قابل تغییر است. من اغلب فقط 250 میلی لیتر در یک زمان تهیه می کنم ، بنابراین فقط 5 گرم عصاره مالت ، 3.75 گرم آگار و 250 میلی لیتر آب استفاده می کنم.

مرحله 3: ظرف پتری خود را با قارچ آلوده کنید

قارچی که می بینید "بدن بارور" نامیده می شود و تنها بخش کوچکی از بدن است. بیشتر بدن آن در درخت (یا در زمین) پنهان است و چوب را مصرف می کند. این قسمت از قارچ میسلیوم نامیده می شود. برای کشتن بدن رشته ای ، شاخک ، ریزوماتیک و میسلیوم سفید کمون Schizophyllum Commune روی یک پتری دیش ، شما نمونه ای از ساقه را گرفته ، استریل کرده و در بشقاب های MEA خود قرار دهید. میسلیوم از نمونه هسته ساقه قارچ عقیم شده رشد می کند و ظرف پتری را مستعمره می کند و شبیه یک حصیر سفید پنبه ای می شود.

شما نیاز دارید:

• صفحات Malt Extract Agar (MEA) که در مرحله قبل آماده کرده اید
• 70٪ ایزوپروپیل الکل (مالش الکل) و یک بطری اسپری
• دستمال توالت
• تیغ جراحی ، یا فقط یک تیغ فولاد ضد زنگ - جعبه برش کار می کند
• موچین فلزی
• دستکش
• شعله - من از لامپ آلکاهول برای عقیم سازی ابزارها استفاده می کنم ، NonDisjunction یک آموزش عالی در مورد نحوه ساخت آن در اینجا دارد.
• سطح استریل برای برش (من فقط از یک ظرف پتری استریل برای این کار استفاده کردم)
• پارافیلم ، یک فیلم پارافین برای بستن ظروف پتری - شما همچنین می توانید از نوار ماسک استفاده کنید.

تکنیک استریل:

هنگام تلاش برای استفاده از تکنیک استریل ، مهمترین نکته ای که باید در نظر داشته باشید این است که باکتری ها و هاگ ها به طور مداوم در هوا می افتند ، بنابراین شما می خواهید تا جایی که ممکن است ظروف پتری خود را پوشانده نگه دارید. هنگامی که درپوش ها را برای ریختن محفظه بالا می برید یا تلقیح می کنید ، همیشه بهتر است درپوش را درست بالای ظرف نگه دارید و به شما اجازه می دهد به صورت افقی به داخل آن دسترسی داشته باشید ، اما درپوش را بالای ظرف نگه دارید تا از ورود باکتری به داخل جلوگیری شود. آنها مجموعه ای عظیم از موجودات انسانی ، باکتریایی ، قارچی و دیگر موجودات هستند - اگرچه نمی توانید آن را ببینید ، اما توسط یک ابر متراکم از میکروب ها که در بدن شما پخش می شوند ، احاطه شده اید. به جای نشستن روی سطح پوست ، میکروبیوم شما به هوا کشیده می شود ، بنابراین ، هرگز دستان خود را روی ظرف پتری تکان ندهید ، یا به ظرف باز خم نشوید و داخل آن را نگاه کنید. و اگر دستکش می پوشید ، شما آنها را دارید؛)

فضای کار نیمه استریل خود را تنظیم کنید

یک سطح کار غیر متخلخل و عاری از زباله و آشغال را انتخاب کنید. محلول را با محلول 70٪ ایزوپروپیل الکل اسپری کرده و با یک حوله کاغذی پاک کنید. شعله خود را در مرکز منطقه کاری خود قرار دهید و آن را روشن کنید. شما باید تا آنجا که ممکن است نزدیک شعله کار کنید زیرا یک میدان استریل کوچک در اطراف آن ایجاد می کند. صفحات MEA خود را در یک طرف و نمونه قارچ خود را در یک سطح برش استریل در طرف دیگر قرار دهید. من معمولاً از یک ظرف پتری استریل به عنوان سطح برش استریل و همچنین یک استراحت ابزار استفاده می کنم. مقداری الکل ایزوپروپیل را در یک لیوان کوچک بریزید - از این وسیله برای استریل کردن تیغه و موچین خود هنگام کار استفاده می کنید.

*OC ~ تلقیح ~!*

قبل از انجام هر کاری ، تیغه و موچین خود را با فرو بردن آنها در ایچوپروپیل آلچ و سپس نگه داشتن آنها روی شعله برای مدتی استریل کنید. پس از عقیم سازی ، اگر آنها را روی سطح برش استریل قرار داده اید ، بگذارید. با استفاده از موچین ، ساقه قارچ را ثابت نگه دارید و یک تکه انتهای آن را برش دهید. این تکه را بردارید و تمام طرفها را برش دهید تا در نهایت یک مکعب کوچک از هسته ساقه قارچ با تمام سطوح بیرونی برداشته شود. این به خلاص شدن از شر میکروبهای دیگر روی قارچ کمک می کند تا فرهنگ شما را آلوده نکند. سپس هسته ساقه را به مدت 30 ثانیه در ایزوپروپیل فرو کنید ، بیرون بیاورید و بگذارید در میدان استریل شعله خشک شود (از شعله برای خشک کردن آن استفاده نکنید ، این باعث قارچ می شود). هنگامی که منتظر خشک شدن هسته ساقه هستید ، موچین خود را دوباره استریل کنید. سپس به سادگی درپوش یکی از بشقاب های MEA خود را به اندازه ای بلند کنید که موچین را از کنار آن بکشید و از موچین استریل شده برای قرار دادن هسته ساقه در مرکز صفحه استفاده کنید. صفحه را با پارافیلم مهر و موم کنید ، و طی چند هفته آینده ، باید شاهد میسلیوم S. Commune استعمار صفحه باشید.

من معمولاً هنگام کار با نمونه های وحشی چندین بشقاب می سازم تا در صورت آلودگی ، حداقل یک فرهنگ تمیز داشته باشم.